1、合適的細胞培養基
 

　　合適的細胞培養基是體外細胞生長(cháng)增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營(yíng)養和促使細胞生長(cháng)增殖的基礎物質(zhì)，而且還提供培養細胞生長(cháng)和繁殖的生存環(huán)境。
 

　　2、血清
 

　　目前，大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一，含有細胞生長(cháng)所需的多種生長(cháng)因子及其它營(yíng)養成分。
 

　　3、無(wú)菌無(wú)毒細胞培養環(huán)境
 

　　無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。
 

　　在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導致細胞中毒死亡。因此，在體外培養細胞時(shí)，必須保持細胞生存環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒，及時(shí)清除細胞代謝產(chǎn)物。
 

　　4、恒定的細胞生長(cháng)溫度
 

　　維持培養細胞旺盛生長(cháng)，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類(lèi)的細胞對培養溫度要求也不同，人體細胞培養的標準溫度為36。5℃±0。5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會(huì )受到影響，甚至死亡。
 

　　培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過(guò)39℃時(shí)，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時(shí)，細胞會(huì )普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復；41-42℃1小時(shí)，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個(gè)別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時(shí)，細胞全部死亡。
 

　　相反，溫度不低于0℃時(shí)，對細胞代謝雖有影響，但并無(wú)傷害作用；把細胞放入25-35℃時(shí)，細胞仍能生存和生長(cháng)，但速度減慢；放在4℃數小時(shí)后，再回到37℃培養，細胞仍能繼續生長(cháng)。細胞代謝隨溫度降低而減慢。當溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細胞可因胞質(zhì)結冰受損而死亡。
 

　　但是，如果向培養液中加入一定量的冷凍保護劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長(cháng)期保存。
 

　　5、合適的氣體環(huán)境
 

　　氣體是哺乳動(dòng)物細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。