以下通用步驟可以在保持細胞完整性的同時(shí)從培養器皿中分離多種細胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細胞系。應通過(guò)實(shí)驗來(lái)確定不同體系所需的佳條件和濃度。
 

　　?在傳代培養時(shí)監測細胞存活率。
 

　　?細胞存活率應大于90%。
 

　　?對于無(wú)血清培養基，建議降低胰酶用量。
 

　　1.去除器皿中原有細胞培養基。
 

　　2.用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細胞。將清洗溶液加到培養瓶中與細胞相對的一側。搖動(dòng)培養瓶1-2分鐘以沖洗細胞層，然后倒掉清洗溶液。
 

　　3.在培養瓶中與細胞相對的一側以2-3ml/25cm2的比例加入選定的解離溶液(見(jiàn)下表)。確保解離溶液能夠覆蓋整個(gè)細胞層。在37℃下孵育培養瓶。并輕輕搖動(dòng)。通常細胞在5-15分鐘內解離。不同細胞系的解離時(shí)間有所不同。仔細觀(guān)測解離過(guò)程，以免損傷細胞。對于難從基質(zhì)上解離下來(lái)的細胞系，可以輕敲培養瓶以加快解離過(guò)程。
 

　　4.當細胞解離時(shí)，豎直放置培養瓶使細胞流向培養瓶底部。向培養瓶中加入培養基。反復吹吸單層表面以分散細胞。計算細胞個(gè)數，然后傳代培養細胞。
 

　　注意：如果使用無(wú)血清培養基，應加入大豆胰酶抑制劑。對于0.25mg/ml的胰酶抑制劑，一般按1：1(體積比)的比例加入即可抑制胰酶。細胞